摘要：分别取6批样品，按供试品溶液的制备操作，测定每粒胶囊中人参皂苷Rb1的含量，结果显示，6批样品中最高含量为1.28 mg 最低为0.91 mg，考虑大生产及原料来源，放宽10 %，故暂拟定本品每粒含人参以人参皂苷Rb1计，不得小于0.82 mg。
关键词：健脑益智胶囊,高效液相色谱,人参皂苷Rb1,含量测定
健脑益智胶囊是由本院长期临床验方研制而成, 由人参、何首乌、枸杞子等药物组成, 具补气养血、健脑益智之功效。用于气血两虚导致的失眠、健忘等症。其中人参为方中君药, 起补中益气之功效，皂苷类成分是人参中的主要化学成分，其中人参皂苷Rb1为主要有效成分之一。本试验选择以人参皂苷Rb1作为含量测定的指示性成分，针对本制剂特点，通过采用高效液相法测定人参皂苷Rb1的含量，以期为控制本制剂质量提供可靠的实验依据。
1 器材与药品
1.1 仪器岛津LC10AC高效液相色谱仪，岛津SPD10A紫外检测器，岛津C7R色谱数据处理机，SK2200H型超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。
1.2 试药人参皂苷Rb1对照品(中国药品生物制品鉴定所);样品：本院制剂室生产(批号：20031103、20031113、20031203、20031213、20031223、20040103)。本实验所用试剂除洗脱剂为色谱纯外，其它均为分析纯。
2 方法和结果
2.1 色谱条件与系统适用性实验 色谱柱：C18;流动相：乙腈水(30∶70);流速0.8 ml·min1;检测波长203 nm;进样量：20μl，分析方法：外标法;理论板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于4000，分离度大于1.5。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液精密称取人参皂苷Rb1对照品2.0362 mg，置10 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得0.2 mg·ml1的对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液取100粒胶囊内容物，研细，精密称取10 g 置锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，称定重量，超声30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，置蒸发皿中，蒸干。残渣以水饱和的正丁醇50 ml分次转移至分液漏斗中，加氨试液振摇提取3次，10 ml/次，合并水层液，用水饱和的正丁醇提取5次，15 ml/次。合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2 次,15 ml/次。合并水层液，再以水饱和的正丁醇15 ml提摇提取2次。合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm) 滤过。
2.2.3 阴性溶液的制备 按处方量称取不含人参的其他药味，按制剂工艺制成制剂后，以供试品溶液制备方法制成阴性溶液。
2.3 色谱分离及空白实验取人参皂苷Rb1对照品溶液、供试品溶液及阴性溶液分别进样，供试液色谱图中人参皂苷Rb1峰分离良好，理论板数大于4 000 (n = 5) ，分离度均大于1.5，阴性溶液在人参皂苷Rb1出峰处不干扰。
2.4 线性关系考察精密吸取人参皂苷Rb1对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 ml 置10 ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μl。以峰面积与对应浓度绘制标准曲线，得回归方程：Y= 39 307X - 51 893，r = 0.999 9。结果表明人参皂苷Rb1在0.407～3.258 mg线性关系良好。
2.5 稳定性取供试品溶液，分别放置2，4，6，8，14，24 h测定峰面积1次，RSD 为1.36 %，说明供试品在24 h 内是稳定的。
2.6 精密度实验取0.204 mg·ml1的人参皂苷Rb1对照品溶液，重复进样5次，测得人参皂苷Rb1峰面积的RSD为0.47%。
2.7 样品测定
2.8 加样回收实验精密称取已知人参皂苷Rb1含量的样品(批号为20031213)6份，分别加入人参皂苷Rb1对照品，按供试品溶液的制备方法提取样品，进样测定，计算回收率。见表2。表2 回收率实验(略)
3 讨论
3.1 文献报道中人参皂苷Rb1的测定方法很多[1，2]，参考上述文献报道选择HPLC法实验，在流动相的选择上我们比较了乙腈甲醇纯水0. 05 %磷酸水溶液( 20∶40∶10∶30);乙腈水(40∶60)、(35∶75)、(30∶70)，结果以乙腈水(30∶70)为流动相分离效果最好，人参皂苷Rb1能与其它成分的峰达到极限分离。
3.2 在样品提取时，选择甲醇回流1 h，超声提取30，45，60 min 4种方法进行了实验比较，发现以甲醇超声提取30 min，提取效果最好。
参考文献：
[1]杨 莹，景 瑞，王 妮. 颈痛片中人参皂苷Rb1 的HPLC 测定方法[J].食品与药品，2005，7 (3A ):58.
[2]赵德华，杨德智.HPLC测定田七痛经胶囊中人参皂苷Rb1、Rg1 的含量[J].中成药，2005，27(5):532.
